Hujayra madaniyatining asosiy afzalliklaridan biri hujayra ko'payishining fizik kimyosini (ya'ni harorat, pH, osmotik bosim, O2 va CO2 tarangligi) va fiziologik muhitni (ya'ni gormonlar va ozuqa moddalarining konsentratsiyasini) boshqarish qobiliyatidir.Haroratdan tashqari, madaniyat muhiti o'sish muhiti tomonidan nazorat qilinadi.
Madaniyatning fiziologik muhiti uning fizik-kimyoviy muhiti kabi aniq bo'lmasa-da, zardob komponentlarini yaxshiroq tushunish, ko'payish uchun zarur bo'lgan o'sish omillarini aniqlash va madaniyatdagi hujayralarning mikro muhitini yaxshiroq tushunish.(Ya'ni hujayra-hujayra o'zaro ta'siri, gaz tarqalishi, matritsa bilan o'zaro ta'sir) endi ma'lum hujayra chiziqlarini sarumsiz muhitda etishtirishga imkon beradi.
1.Madaniyat muhiti hujayra o'sishiga ta'sir qiladi
E'tibor bering, har bir hujayra turi uchun hujayra madaniyati sharoitlari har xil.
Muayyan hujayra turi uchun zarur bo'lgan madaniyat sharoitlaridan chetga chiqish oqibatlari g'ayritabiiy fenotiplarning namoyon bo'lishidan hujayra madaniyatining to'liq etishmovchiligigacha bo'lgan oqibatlarga olib keladi.Shuning uchun biz sizni qiziqtirgan hujayra liniyasi bilan tanishishingizni va tajribangizda foydalanadigan har bir mahsulot uchun ko'rsatilgan ko'rsatmalarga qat'iy rioya qilishingizni tavsiya qilamiz.
2. Hujayralaringiz uchun optimallashtirilgan hujayra madaniyati muhitini yaratish bo'yicha ehtiyot choralari:
Madaniy vositalar va sarum (qo'shimcha ma'lumot uchun quyida ko'ring)
pH va CO2 darajalari (qo'shimcha ma'lumot uchun pastga qarang)
Plastmassani etishtirish (qo'shimcha ma'lumot olish uchun pastga qarang)
Harorat (qo'shimcha ma'lumot uchun pastga qarang)
2.1 Madaniy vositalar va sarum
Madaniyat muhiti madaniy muhitning eng muhim qismidir, chunki u hujayralar o'sishi uchun zarur bo'lgan ozuqa moddalari, o'sish omillari va gormonlar bilan ta'minlaydi va kulturaning pH va osmotik bosimini tartibga soladi.
Dastlabki hujayra madaniyati tajribalari to'qima ekstraktlari va tana suyuqliklaridan olingan tabiiy muhit yordamida amalga oshirilgan bo'lsa-da, standartlashtirishga bo'lgan ehtiyoj, ommaviy axborot vositalari sifati va talabning ortishi aniq muhitning rivojlanishiga olib keldi.Axborot vositalarining uchta asosiy turi bazal media, qisqartirilgan sarum muhiti va sarumsiz muhit bo'lib, ular sarum qo'shimchasiga turli talablarga ega.
2.1.1 Asosiy vosita
Gibco hujayra madaniyat muhiti
Ko'pgina hujayra chiziqlari aminokislotalar, vitaminlar, noorganik tuzlar va uglerod manbalari (masalan, glyukoza) bo'lgan asosiy muhitda yaxshi o'sadi, ammo bu asosiy vosita formulalari sarum bilan to'ldirilishi kerak.
2.1.2 Kamaytirilgan sarum muhiti
Gibco Past Serum Medium bilan shisha
Hujayra madaniyati tajribalarida sarumning salbiy ta'sirini kamaytirishning yana bir strategiyasi sarum kamaytirilgan vositalardan foydalanishdir.Qisqartirilgan sarum muhiti ozuqa moddalari va hayvonlardan olingan omillarga boy asosiy vosita formulasi bo'lib, zarur bo'lgan sarum miqdorini kamaytirishi mumkin.
2.1.3 Sarumsiz muhit
Gibco sarumsiz vosita bilan shisha
Sarumsiz vosita (SFM) zardobni tegishli oziqlanish va gormon formulalari bilan almashtirish orqali hayvonlar sarumidan foydalanishni chetlab o'tadi.Ko'pgina birlamchi kulturalar va hujayra liniyalarida zardobsiz muhit formulalari mavjud, jumladan, Xitoy hamster tuxumdonining (CHO) rekombinant oqsil ishlab chiqarish liniyasi, turli gibridoma hujayra liniyalari, hasharotlar Sf9 va Sf21 (Spodoptera frugiperda), shuningdek, virus ishlab chiqarish uchun xost uchun. (masalan, 293, VERO, MDCK, MDBK) va boshqalar. Sarumsiz muhitdan foydalanishning asosiy afzalliklaridan biri o'sish omillarining mos kombinatsiyasini tanlash orqali muhitni muayyan hujayra turlari uchun tanlab olish qobiliyatidir.Quyidagi jadvalda sarumsiz vositalarning afzalliklari va kamchiliklari keltirilgan.
Afzallik
Aniqlikni oshiring
Yana barqaror ishlash
Osonroq tozalash va quyi oqimga ishlov berish
Hujayra funktsiyasini to'g'ri baholang
Hosildorlikni oshirish
Fiziologik reaktsiyalarni yaxshiroq nazorat qilish
Kengaytirilgan hujayra media aniqlash
Kamchilik
Hujayra turiga xos muhit formulasi talablari
Yuqori reagent tozaligi kerak
O'sishning sekinlashishi
2.2.1 pH darajasi
Ko'pgina oddiy sutemizuvchilar hujayra chiziqlari pH 7,4 da yaxshi o'sadi va turli hujayra chiziqlari orasidagi farqlar kichikdir.Shu bilan birga, ba'zi o'zgartirilgan hujayra liniyalari ozgina kislotali muhitda (pH 7,0 - 7,4) yaxshiroq o'sishi ko'rsatilgan, ba'zi oddiy fibroblast hujayra chiziqlari biroz ishqoriy muhitni afzal ko'radi (pH 7,4 - 7,7).Sf9 va Sf21 kabi hasharotlar hujayralari liniyalari pH 6,2 da eng yaxshi o'sadi.
2.2.2 CO2 darajasi
O'sish muhiti madaniyatning pH darajasini nazorat qiladi va pH o'zgarishiga qarshilik ko'rsatish uchun madaniyatdagi hujayralarni buferlaydi.Odatda, bu buferlash organik (masalan, HEPES) yoki CO2-bikarbonat asosidagi buferlarni o'z ichiga olgan holda amalga oshiriladi.Muhitning pH darajasi erigan karbonat angidrid (CO2) va bikarbonat (HCO3-)ning nozik muvozanatiga bog'liq bo'lganligi sababli, atmosferadagi CO2 ning o'zgarishi muhitning pH qiymatini o'zgartiradi.Shuning uchun, CO2-bikarbonat asosidagi bufer bilan buferlangan muhitdan foydalanganda, ayniqsa, ochiq kulturali idishlarda hujayralarni etishtirish yoki yuqori konsentratsiyalarda o'zgartirilgan hujayra liniyalarini etishtirishda ekzogen CO2 dan foydalanish kerak.Ko'pgina tadqiqotchilar odatda havoda 5-7% CO2 ishlatsa ham, ko'pchilik hujayra madaniyati tajribalarida odatda 4-10% CO2 dan foydalanadi.Biroq, har bir muhitda to'g'ri pH va osmotik bosimga erishish uchun tavsiya etilgan CO2 tarangligi va bikarbonat konsentratsiyasi mavjud;qo'shimcha ma'lumot uchun, iltimos, o'rta ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga qarang.
2.3 Plastmassalarni yetishtirish
Hujayra madaniyati plastmassalari turli xil hujayra madaniyati ilovalariga mos keladigan turli shakllarda, o'lchamlarda va sirtlarda mavjud.Hujayra madaniyatini qo'llash uchun to'g'ri plastmassani tanlashga yordam berish uchun quyida joylashgan hujayra madaniyati plastik sirt yo'riqnomasidan va hujayra madaniyati konteyneri qo'llanmasidan foydalaning.
Barcha Thermo Scientific Nunc hujayra madaniyati plastmassalarini ko'rish (reklama havolasi)
2.4 Harorat
Hujayra madaniyati uchun optimal harorat ko'p jihatdan hujayralar ajratilgan uy egasining tana haroratiga va kamroq darajada haroratning anatomik o'zgarishiga bog'liq (masalan, terining harorati skelet mushaklari haroratidan past bo'lishi mumkin). ).Hujayra madaniyati uchun haddan tashqari qizib ketish qizib ketishdan ko'ra jiddiyroq muammodir.Shuning uchun inkubatordagi harorat odatda optimal haroratdan bir oz pastroqda o'rnatiladi.
2.4.1 Har xil hujayra chiziqlari uchun optimal harorat
Ko'pchilik odam va sutemizuvchilar hujayra liniyalari optimal o'sish uchun 36 ° C dan 37 ° C gacha haroratda saqlanadi.
Hasharot hujayralari optimal o'sish uchun 27 ° C da o'stiriladi;ular past haroratlarda va 27 ° C dan 30 ° C gacha bo'lgan haroratlarda sekinroq o'sadi.30 ° C dan yuqori, hasharotlar hujayralarining hayotiyligi pasayadi, hatto 27 ° C ga qaytsa ham, hujayralar tiklanmaydi.
Qushlarning hujayra liniyalari maksimal o'sishga erishish uchun 38,5 ° S haroratga muhtoj.Ushbu hujayralar 37 ° C da saqlanishi mumkin bo'lsa-da, ular sekinroq o'sadi.
Sovuq qonli hayvonlardan (masalan, amfibiyalar, sovuq suv baliqlari) olingan hujayra chiziqlari 15 ° C dan 26 ° C gacha bo'lgan keng harorat oralig'iga bardosh bera oladi.
Xabar vaqti: 01-fevral 2023-yil