Hujayra madaniyatining ifloslanishi osongina hujayra madaniyati laboratoriyalarida eng keng tarqalgan muammoga aylanishi mumkin, ba'zan esa juda jiddiy oqibatlarga olib keladi.Hujayra madaniyati ifloslantiruvchi moddalarni ikki toifaga bo'lish mumkin: kimyoviy ifloslantiruvchi moddalar, masalan, o'rta, sarum va suv aralashmalari, endotoksinlar, plastifikatorlar va yuvish vositalari va bakteriyalar, mog'orlar, xamirturushlar, viruslar, mikoplazmalar kabi biologik ifloslantiruvchilar.Boshqa hujayra liniyalari bilan ifloslangan.Kontaminatsiyani to'liq bartaraf etishning iloji bo'lmasa-da, uning manbasini chuqur tushunish va yaxshi aseptik usullarga rioya qilish orqali uning chastotasi va zo'ravonligini kamaytirish mumkin.
1.Ushbu bo'limda biologik ifloslanishning asosiy turlari ko'rsatilgan:
Bakterial zaharlanish
Mog'or va virus bilan ifloslanish
Mikoplazma bilan ifloslanish
Xamirturush bilan ifloslanish
1.1 Bakterial ifloslanish
Bakteriyalar hamma joyda tarqalgan bir hujayrali mikroorganizmlarning katta guruhidir.Ular odatda bir necha mikron diametrga ega va sharlardan tortib novdalar va spirallargacha bo'lgan turli shakllarda bo'lishi mumkin.Hamma joyda keng tarqalganligi, kattaligi va tez o'sish tezligi tufayli bakteriyalar, xamirturush va mog'or bilan birga hujayra madaniyatida eng ko'p uchraydigan biologik ifloslantiruvchi moddalardir.
1.1.1 Bakterial kontaminatsiyani aniqlash
Bakterial kontaminatsiya madaniyatni infektsiyalanganidan keyin bir necha kun ichida vizual tekshirish orqali osongina aniqlanadi;
Infektsiyalangan madaniyatlar odatda bulutli ko'rinadi (ya'ni, loyqa), ba'zan sirtida nozik bir plyonka bilan.
Madaniy muhitning pH darajasining keskin pasayishi ham tez-tez uchraydi.
Kam quvvatli mikroskop ostida bakteriyalar hujayralar orasidagi mayda harakatlanuvchi granulalar bo'lib ko'rinadi va yuqori quvvatli mikroskop ostida kuzatish alohida bakteriyalarning shakllarini hal qilishi mumkin.
1.2 Mog'or va virus bilan ifloslanish
1.2.1 Qolib ifloslanishi
Mog'orlar qo'ziqorin qirolligining eukaryotik mikroorganizmlari bo'lib, ular hifa deb ataladigan ko'p hujayrali filamentlar shaklida o'sadi.Ushbu ko'p hujayrali filamentlarning birlashtiruvchi tarmoqlarida koloniyalar yoki miselyum deb ataladigan genetik jihatdan bir xil yadrolar mavjud.
Xamirturush bilan ifloslanishga o'xshab, kulturaning pH darajasi ifloslanishning dastlabki bosqichida barqaror bo'lib qoladi va keyin kultura yanada jiddiy infektsiyalangan va loyqa holga kelganda tez o'sib boradi.Mikroskop ostida mitseliy odatda filamentli, ba'zan zich spora to'plamlari shaklida bo'ladi.Ko'pgina mog'orlarning sporalari uyqu fazasida juda qattiq va noqulay muhitda omon qolishi mumkin va faqat to'g'ri o'sish sharoitlari mavjud bo'lganda faollashadi.
1.2.2 Virus bilan ifloslanish
Viruslar mikroskopik infektsion agentlar bo'lib, ular hujayraning ko'payish mexanizmini egallaydi.Ularning juda kichik o'lchamlari ularni madaniyatda aniqlashni va hujayra madaniyati laboratoriyalarida ishlatiladigan reagentlardan olib tashlashni qiyinlashtiradi.Ko'pgina viruslar o'z xostlariga juda qattiq talablarga ega bo'lganligi sababli, ular odatda xostdan boshqa turlarning hujayra madaniyatiga salbiy ta'sir ko'rsatmaydi.
Biroq, virus bilan zararlangan hujayra madaniyatidan foydalanish laboratoriya xodimlarining sog'lig'i uchun jiddiy xavf tug'dirishi mumkin, ayniqsa laboratoriyada odam yoki primat hujayralari o'stirilgan bo'lsa.
Hujayra madaniyatidagi virusli infektsiyani elektron mikroskopiya, antikorlar to'plami bilan immuno-bo'yash, Elishay yoki tegishli virusli primerlar bilan PCR bilan aniqlash mumkin.
1.3 Mikoplazma bilan ifloslanish
Mikoplazmalar hujayra devori bo'lmagan oddiy bakteriyalar bo'lib, ular eng kichik o'z-o'zini ko'paytiruvchi organizmlar deb hisoblanadi.Mikoplazmani juda kichik o'lchamlari (odatda 1 mikrondan kam) tufayli ular juda yuqori zichlikka erishmaguncha va hujayra madaniyatining yomonlashishiga olib kelmaguncha aniqlash qiyin;Ungacha, odatda, infektsiyaning aniq belgisi yo'q.
1.3.1 Mikoplazmaning ifloslanishini aniqlash
Ba'zi sekin o'sadigan mikoplazmalar kulturalarda hujayra o'limiga olib kelmasdan saqlanib qolishi mumkin, ammo ular kulturalardagi xost hujayralarining xatti-harakati va metabolizmini o'zgartiradi.
Surunkali mikoplazma infektsiyasi suspenziya kulturasida hujayra proliferatsiyasining kamayishi, to'yinganlik zichligi va aglutinatsiyaning pasayishi bilan tavsiflanishi mumkin.
Biroq, mikoplazmaning ifloslanishini aniqlashning yagona ishonchli usuli - bu floresan bo'yash (masalan, Hoechst 33258), ELISA, PCR, immuno-bo'yoq, avtoradiografiya yoki mikrobial test yordamida kulturani muntazam ravishda tekshirish.
1.4 Xamirturush bilan ifloslanish
Xamirturushlar qo'ziqorin qirolligining bir hujayrali eukariotlari bo'lib, ularning o'lchamlari bir necha mikrondan (odatda) 40 mikrongacha (kamdan-kam).
1.4.1 Xamirturush bilan ifloslanishni aniqlash
Bakterial kontaminatsiyada bo'lgani kabi, xamirturush bilan ifloslangan madaniyatlar bulutli bo'lishi mumkin, ayniqsa ifloslanish rivojlangan bosqichda bo'lsa.Xamirturush bilan ifloslangan madaniyatlarning pH darajasi ifloslanish yanada og'irlashguncha juda kam o'zgaradi, bu bosqichda pH odatda oshadi.Mikroskop ostida xamirturush alohida tuxumsimon yoki sharsimon zarrachalar ko'rinishida ko'rinadi va kichikroq zarrachalar hosil qilishi mumkin.
2. O'zaro infektsiya
Mikrobial kontaminatsiya kabi keng tarqalgan bo'lmasa-da, HeLa va boshqa tez o'sadigan hujayra liniyalari bilan ko'plab hujayra liniyalarining keng tarqalgan o'zaro kontaminatsiyasi jiddiy oqibatlarga olib keladigan aniq belgilangan muammodir.Hujayra liniyalarini taniqli hujayra banklaridan oling, hujayra liniyalarining xususiyatlarini muntazam tekshirib turing va yaxshi aseptik usullardan foydalaning.Ushbu amaliyotlar o'zaro kontaminatsiyani oldini olishga yordam beradi.DNK barmoq izlari, karyotiplash va izotiplash hujayra madaniyatida o'zaro kontaminatsiya mavjudligini tasdiqlashi mumkin.
Mikrobial kontaminatsiya kabi keng tarqalgan bo'lmasa-da, HeLa va boshqa tez o'sadigan hujayra liniyalari bilan ko'plab hujayra liniyalarining keng tarqalgan o'zaro kontaminatsiyasi jiddiy oqibatlarga olib keladigan aniq belgilangan muammodir.Hujayra liniyalarini taniqli hujayra banklaridan oling, hujayra liniyalarining xususiyatlarini muntazam tekshirib turing va yaxshi aseptik usullardan foydalaning.Ushbu amaliyotlar o'zaro kontaminatsiyani oldini olishga yordam beradi.DNK barmoq izlari, karyotiplash va izotiplash hujayra madaniyatida o'zaro kontaminatsiya mavjudligini tasdiqlashi mumkin.
Xabar vaqti: 01-fevral 2023-yil